Bộ nhuộm huỳnh quang màu xanh lá cây màng tế bào DiO

 

Tên sản phẩm	Con mèo. KHÔNG	Thông số kỹ thuật.
Bộ nhuộm huỳnh quang màu xanh lá cây màng tế bào DiO	G1704	100-1000 T

 

 

DiO, còn được gọi là DiOC18(3), 3-octadecyl{{3}fer3-(3-octadecyl-2(3H)-benzoxazol-2-ylidene )-1-propen-1-yl]benzoxazole perchlorate, có trọng lượng phân tử 881,72, là một loại chất ưa mỡ, chuỗi dài thuốc nhuộm dialkyldicarbocyanine, thuốc nhuộm huỳnh quang, thường được sử dụng trong việc dán nhãn màng tế bào và các cấu trúc sinh học hòa tan trong chất béo khác. Sau khi vào màng tế bào, DiO có thể khuếch tán sang một bên và dần dần nhuộm màu toàn bộ màng tế bào. Huỳnh quang DiO trước khi đi vào màng tế bào rất yếu, và cường độ huỳnh quang sẽ được tăng cường đáng kể khi liên kết với tế bào và nó có thể phát ra huỳnh quang màu xanh lá cây sau khi kích thích và có thể được phát hiện bởi các bộ lọc FITC tiêu chuẩn. Bước sóng kích thích tối đa của DiO là 484nm và bước sóng phát xạ tối đa là 501nm. Theo đặc điểm của DiO, nó có thể nhuộm các tế bào sống cũng như các tế bào cố định. Ngoài ra. Các đầu dò DiO thường không ảnh hưởng đến khả năng tồn tại của tế bào, do đó, các tế bào được dán nhãn tiến hoặc lùi hoặc một số chất (exosome) có thể được sử dụng làm phát hiện chất đánh dấu.

Bộ nhuộm huỳnh quang màu xanh lá cây màng tế bào DiO chứa đầu dò huỳnh quang DiO và bộ đệm nhuộm được tối ưu hóa, có thể giúp nhuộm màng tế bào nhanh hơn, huỳnh quang sáng hơn và ổn định hơn.

 

 

Vận chuyển bằng đá khô; bảo quản ở -20 độ trong bóng tối, có giá trị trong 6 tháng.

 

 

Số thành phần	Thành phần	G1704
G1704-1	Đầu dò huỳnh quang màu xanh lá cây màng tế bào DiO	400 μL
G1704-2	Đệm nhuộm	100mL
Thủ công		Một bản sao

 

 

1. Chuẩn bị dung dịch làm việc nhuộm DiO:

Trộn và pha loãng Đầu dò huỳnh quang màu xanh lá cây màng tế bào DiO với dung dịch đệm nhuộm theo tỷ lệ 1:250 để chuẩn bị Dung dịch làm việc nhuộm DiO (sẵn sàng sử dụng); lưu ý rằng tỷ lệ pha loãng đầu dò DiO có thể được điều chỉnh ở mức 1:250-1:500 tùy theo tình huống cụ thể để đạt được hiệu quả nhuộm màu tốt nhất.

2. Nhuộm tế bào huyền phù sống

2.1. Ly tâm tế bào lơ lửng ở tốc độ 500-1,000×g ở nhiệt độ phòng trong 3-5 phút, loại bỏ phần nổi phía trên tế bào;

2.2. Thêm lượng dung dịch nhuộm Dio thích hợp để phân tán lại các tế bào đạt mật độ tế bào cuối cùng ở mức 1-2×106 tế bào/mL.

2.3. Ủ ở 37 độ trong bóng tối trong 5-20 phút. Thời gian ủ tối ưu khác nhau đối với các tế bào khác nhau. Bắt đầu với 5 phút và tối ưu hóa thời gian ủ dựa trên kết quả nhuộm cuối cùng.

2.4. Khi kết thúc quá trình ủ, ly tâm ở tốc độ 500-1000 g trong 3-5 phút ở nhiệt độ phòng và hút dung dịch làm việc nhuộm DiO;

2.5. Các tế bào được treo lại bằng PBS đã được làm ấm trước hoặc môi trường nuôi cấy tế bào ở 37 độ và ly tâm ở tốc độ 500-1000 g trong 3-5 phút để loại bỏ phần nổi phía trên;

2.6. Lặp lại bước 2.5.

2.7. Được phát hiện bằng phương pháp tế bào học dòng chảy trực tiếp hoặc bằng kính hiển vi huỳnh quang sau khi chuyển tế bào sang đĩa nhiều giếng, đĩa nuôi cấy tế bào hoặc phiến kính leo tế bào. Dio có cực đại kích thích ở bước sóng 484 nm và cực đại phát xạ ở bước sóng 501 nm.

3. Nhuộm tế bào sống bám dính (6-ví dụ về đĩa giếng):

3.1. Gieo các tế bào bám dính vào đĩa 6-giếng với mật độ nhất định.

3.2. Loại bỏ môi trường nuôi cấy và rửa tế bào hai lần bằng PBS (Khuyến nghị G4202). Thêm 1 mL dung dịch nhuộm Dio (các đĩa giếng có kích thước khác, được điều chỉnh cho phù hợp để đảm bảo thuốc nhuộm bao phủ các tế bào);

3.3. Ủ ở nhiệt độ 37 độ trong bóng tối trong 5-20 phút. Thời gian ủ tối ưu khác nhau đối với các tế bào khác nhau. Bắt đầu với 5 phút và tối ưu hóa thời gian ủ dựa trên kết quả nhuộm cuối cùng.

3.4. Hút dung dịch làm việc nhuộm màng tế bào và rửa tế bào 1-2 lần bằng PBS hoặc môi trường tế bào đã được làm nóng trước.

3.5. Thêm môi trường nuôi cấy tế bào đã được làm ấm trước hoặc môi trường tế bào ở 37 độ và phát hiện tế bào bằng kính hiển vi huỳnh quang. Dio có cực đại kích thích ở bước sóng 484 nm và cực đại phát xạ ở bước sóng 501 nm.

4. Nhuộm tế bào bám cố định:

4.1. Tiền xử lý mẫu:

Đối với tế bào: Loại bỏ môi trường tế bào và rửa 1-2 lần bằng PBS. Thêm dung dịch cố định paraformaldehyde 4% (Khuyến nghị G1101) trong 10 phút ở nhiệt độ phòng. Loại bỏ dung dịch cố định và rửa 2-3 lần bằng PBS;

4.2. Tính thấm: Thêm 0.1-0,5% Triton-100 (được điều chế bằng PBS) và thấm trong 10 phút ở nhiệt độ phòng. Loại bỏ dung dịch thấm và rửa 2-3 lần bằng PBS.

4.3. (Tùy chọn, ghi nhãn miễn dịch huỳnh quang) Ủ với kháng thể theo quy trình nhuộm miễn dịch hoặc ủ với các thuốc nhuộm khác.

Lưu ý: Dung dịch chặn, dung dịch pha loãng kháng thể và dung dịch rửa nhuộm miễn dịch không được chứa chất tẩy rửa.

4.4. Thêm một lượng dung dịch nhuộm DiO thích hợp để phủ lên các tế bào, ủ ở 37 độ tránh ánh sáng trong 5-20 phút và hút dung dịch nhuộm DiO. Nên điều chỉnh thời gian nhuộm cho từng mẫu tế bào cụ thể để đạt được kết quả nhuộm tối ưu;

4.5. Các tế bào được rửa 2-3 lần bằng PBS và sau đó đặt dưới kính hiển vi huỳnh quang để quan sát (các tế bào cần được phủ một lượng PBS thích hợp).DiO có bước sóng kích thích tối đa là 484nm và bước sóng phát xạ tối đa là 501nm.

5. Ghi nhãn huỳnh quang của exosome:

5.1. Kết tủa exosome được treo lại với lượng dung dịch làm việc nhuộm DiO thích hợp.

5.2. Ủ ở 37 độ trong 30 phút trong bóng tối.

5.3. (tùy chọn) Pha loãng mẫu với 10-thể tích gấp PBS.

5.4. Chiết xuất exosome một lần nữa theo quy trình chiết trước đó để loại bỏ thuốc nhuộm dư thừa.

5.5. Thu thập kết tủa exosome và tái phân tán trong PBS để thu được exosome được dán nhãn DIO. Nó có thể được sử dụng cho các thí nghiệm tiếp theo, chẳng hạn như sự hấp thu của tế bào.

 

 

1. Tất cả các thuốc nhuộm huỳnh quang đều có vấn đề về quá trình dập tắt, vui lòng tránh ánh sáng trong quá trình hoạt động để làm chậm quá trình dập tắt huỳnh quang.

2. Do đầu dò ưa chất béo, vui lòng tránh sử dụng thuốc thử có chứa glycerin hoặc chất hữu cơ khác.

3. Nếu cần cố định, chúng tôi khuyên bạn nên cố định trong 4% paraformaldehyde. Các giải pháp khắc phục không phù hợp khác sẽ dẫn đến nền huỳnh quang cao.

4. Tỷ lệ pha loãng tối ưu và thời gian ủ của đầu dò phải được điều chỉnh theo tình hình thực tế do độ nhạy khác nhau giữa các tế bào và yêu cầu thí nghiệm.

5. Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng đeo kính an toàn, găng tay hoặc quần áo bảo hộ.

 

Chỉ dành cho mục đích nghiên cứu!

 

 

Chú phổ biến: Bộ nhuộm huỳnh quang màu xanh lá cây màng tế bào dio, Trung Quốc nhà sản xuất, nhà cung cấp, nhà máy sản xuất bộ nhuộm huỳnh quang màng tế bào dio