Bộ xét nghiệm gen phóng viên Mono-Lumi Ranilla Luciferase

 

Tên sản phẩm	Con mèo. KHÔNG.	Thông số kỹ thuật.
Bộ xét nghiệm gen phóng viên Mono-Lumi Ranilla Luciferase	G1703-100T	100T

 

 

Hệ thống Luciferase chủ yếu được sử dụng để phát hiện gen phóng viên. Các yếu tố điều hòa phiên mã của gen mục tiêu được sao chép vào dòng ngược dòng và dòng cuối của Luciferase để tạo ra plasmid gen báo cáo. Sau đó, plasmid được chuyển vào tế bào và sau khi xử lý các tế bào được chuyển nhiễm bằng thuốc hoặc các chất kích thích khác, các tế bào được thu thập và ly giải, đồng thời đo hoạt tính luciferase trong dịch ly giải. Sự điều hòa phiên mã của gen mục tiêu tác động của các kích thích ngoại sinh như thuốc được xác định bởi hoạt động của luciferase.

 

Bộ xét nghiệm gen phóng viên Mono-Lumi Ranilla Luciferase, sử dụng Ranilla Luciferase, xúc tác quá trình oxy hóa chất nền Coelenterazine thành Coelenteramide khi có mặt oxy và tạo ra huỳnh quang sinh học trong quá trình này. Nguyên tắc cường độ huỳnh quang được tạo ra tỷ lệ thuận với hoạt động luciferin có thể là nhanh chóng được phát hiện. Bộ dụng cụ được đặc trưng bởi khả năng phát hiện nhanh, độ nhạy cao và phạm vi phát hiện rộng.

 

 

Vận chuyển bằng đá khô; Bảo quản ở -80 độ, tránh ánh sáng trong 12 tháng; Bảo quản -20 độ tránh ánh sáng, khuyến nghị sử dụng trong vòng 6 tháng.

 

 

Số thành phần	Thành phần	G1703-100T
G1703-1	Bộ đệm ly giải tế bào	50mL
G1703-2	Chất nền phản ứng Ranilla Luciferase (50×)	200 μL
G1703-3	Bộ đệm phản ứng Ranilla Luciferase	10mL
Thủ công		1 cái

 

 

1. Chuẩn bị dung dịch làm việc 1× Ranilla Luciferase Reaction:

1.1. Bộ sản phẩm được rã đông ở nhiệt độ phòng và trộn lộn ngược để đảm bảo mỗi thành phần được hòa tan hoàn toàn. Chất nền phản ứng Ranilla Luciferase (50×) phải được rã đông trên đá và ly tâm nhanh để đảm bảo thuốc thử chìm xuống đáy ống;

1.2. Chất nền phản ứng Ranilla Luciferase (50×) được pha loãng 50-gấp với Bộ đệm phản ứng Ranilla Luciferase, tức là, 10 μL Chất nền phản ứng Ranilla Luciferase (50×) được trộn với Bộ đệm phản ứng Ranilla Luciferase 490 μL để thu được 500 μL của 1 × Giải pháp làm việc phản ứng Ranilla Luciferase;

Lưu ý: Pha chế theo liều lượng để tránh lãng phí. Nên chuẩn bị và sử dụng dung dịch làm việc 1× Ranilla Luciferase Reaction ngay bây giờ.

2. Tiền xử lý và ly giải tế bào:

2.1. Các tế bào được cấy vào các đĩa tương ứng và được chuyển gen hoặc các biện pháp xử lý trước liên quan khác tùy theo nhu cầu thí nghiệm;

2.2. Đối với tế bào bám dính: sau khi loại bỏ môi trường nuôi cấy tế bào ban đầu, thêm lượng Cell Lysis Buffer tương ứng theo bảng bên dưới để phủ kín tế bào; Đối với tế bào lơ lửng, chuyển tế bào vào ống ly tâm, ly tâm để loại bỏ môi trường và thêm lượng Cell Lysis Buffer tương ứng để phân tán lại các tế bào theo bảng dưới đây;

 

Tấm nuôi cấy tế bào	Dung dịch đệm ly giải tế bào/giếng
6-à	500 μL
12-à	300 μL
24-à	200 μL
48-à	150 μL
96-à	100 μL

 

2.3. Sau khi ly giải đủ trong 10-20 phút ở nhiệt độ phòng, tế bào được cạo và thu vào ống ly tâm 1,5 mL, ly tâm ở 4 độ, 12000 g trong 10 phút và phần nổi phía trên (lysate tế bào) được giữ lại để sử dụng dự phòng;

3. Phát hiện Ranilla Luciferase:

3.1. 1× Dung dịch làm việc phản ứng Ranilla Luciferase được chuẩn bị trước được đưa về nhiệt độ phòng và thêm vào đĩa giếng màu trắng đục 96-ở tốc độ 100 μL/giếng;

3.2. Chất nổi trên bề mặt ly giải tế bào được giữ lại ở bước 2 được thêm vào đĩa giếng 96-ở trên với tốc độ 20 µL/giếng;

3.3. Dao động theo chiều ngang là đồng nhất và việc phát hiện phát quang hóa học được thực hiện ngay lập tức bằng Máy đo độ sáng, nhãn enzyme đa chức năng với mô-đun phát hiện phát quang hóa học hoặc các thiết bị khác có khả năng phát hiện phát quang sinh học,

 

 

1. Trước khi phát hiện, dung dịch hoạt động 1× Ranilla Luciferase Reaction cần được khôi phục về nhiệt độ phòng trước khi sử dụng.

2. Bộ đệm phản ứng Ranilla Luciferase có một số kết tủa sau khi rã đông, đây là hiện tượng bình thường và cần lắc kỹ trước khi sử dụng để đảm bảo rằng nó được hòa tan hoàn toàn.

3. Khi tiến hành phát hiện nhiều mẫu, việc bổ sung dung dịch làm việc 1× Ranilla Luciferase Reaction phải được kiểm soát trong khoảng thời gian ngắn nhất có thể. Nên sử dụng pipet đa kênh để thêm mẫu và chú ý xem lực hút có thể tích mỗi giếng của pipet là nhất quán.

4. Để tránh nhiễu giữa các giếng, nên sử dụng các tấm giếng màu trắng đục. Các tấm đen mờ cũng có thể được sử dụng, nhưng màu đen sẽ hấp thụ tín hiệu huỳnh quang và làm giảm tín hiệu huỳnh quang được phát hiện.

5. Vì sức khỏe và sự an toàn của bạn, vui lòng mặc áo khoác phòng thí nghiệm và đeo găng tay trong khi vận hành.

 

Chỉ dành cho mục đích nghiên cứu!

 

 

Chú phổ biến: bộ xét nghiệm gen phóng viên mono-lumi ranilla luciferase, nhà sản xuất, nhà cung cấp, nhà máy sản xuất bộ xét nghiệm gen phóng viên mono-lumi ranilla luciferase của Trung Quốc