Cột sắc ký để tách các exosome (Chất nổi trên bề mặt tế bào)

Exosome tồn tại tự nhiên trong chất dịch cơ thể như máu, nước bọt, nước tiểu và sữa mẹ. Chúng là các túi màng có kích thước nano với kích thước và kích thước hạt đồng đều từ 30 đến 150nm được các tế bào tích cực tiết ra vào không gian ngoại bào. Túi này có các dấu hiệu đặc hiệu riêng và được bao phủ bởi protein, mRNA, miRNA, lipid và các chất khác, có thể được sử dụng làm con đường truyền tín hiệu và chất giữa các tế bào và tham gia vào các quá trình tăng trưởng tế bào, tăng sinh tế bào, tế bào. biệt hóa, di chuyển tế bào, hình thành mạch và phát triển khối u.

Sản phẩm này là cột sắc ký loại trừ kích thước (SEC) thích hợp để phân tách và tinh chế nhanh chóng các exosome huyết thanh/huyết tương. Nó có thể giữ lại các exosome có độ tinh khiết cao và hoạt động tự nhiên cao đồng thời loại bỏ protein một cách hiệu quả; Tránh hiệu quả sự phá hủy cấu trúc màng ngoại bào do lực ly tâm cực cao gây ra trong các phương pháp siêu ly tâm truyền thống, đồng thời giảm tác động của protein nồng độ cao và các chất khác đến độ tinh khiết của exosome trong phương pháp kết tủa truyền thống.

Vận chuyển ở nhiệt độ phòng; Bảo quản ở nhiệt độ phòng với thời hạn sử dụng là 12 tháng.

1. Chuẩn bị

a) Chuẩn bị dung dịch đệm vô trùng ở nhiệt độ phòng, chẳng hạn như PBS (khuyến nghị G4202);

b) Chuẩn bị nhiệt độ phòng, thuốc thử NaOH 0,1M vô trùng và etanol 20%;

c) Trước khi sử dụng cột tách, tháo nắp trên màu đỏ của cột tách và đặt lên giá đỡ (khuyến nghị G6063) để sử dụng;

2. Tách exosome

a) Sử dụng mẫu sinh học huyết thanh/huyết tương 0.22 µm lọc màng, tinh chế sơ bộ để dự phòng;

b) Tháo nắp đáy màu trắng của cột tách, sau khi chất lỏng bảo vệ bên trong cột chảy ra ngoài, thêm tổng cộng 30 mL chất lỏng dung dịch đệm vào để làm sạch cột tách;

c) Sau khi toàn bộ đệm phía trên tấm sàng đi vào cột tách; Lấy {{0}},5mL huyết thanh/huyết tương dự phòng từ bước 2.a) và thêm vào giữa tấm sàng (nếu nhỏ hơn 0,5mL, thêm dung dịch đệm vào định mức tới 0,5mL);

d) Sau khi toàn bộ huyết thanh/huyết tương qua tấm sàng và đi vào cột tách, thêm 2,5mL dung dịch đệm;

e) Sau khi toàn bộ dung dịch đệm ở bước trước đi qua tấm sàng và đi vào cột tách, thêm 1 mL dung dịch đệm. Đồng thời, thu thập 1 mL dung dịch rửa trôi rất giàu exosome hoạt tính tự nhiên và có thể được sử dụng cho các thí nghiệm tiếp theo hoặc đông lạnh ở mức -80 để dự phòng;

3. Xử lý sau tách

a) Sau khi tách exosome xong, thêm tổng cộng 30 mL dung dịch đệm vào theo mẻ để làm sạch cột tách;

b) Nếu cần tiếp tục sử dụng cột tách để tách exosome huyết thanh/huyết tương, lặp lại các bước từ 2.c) đến 2.e);

c) Nếu không cần tiếp tục sử dụng cột tách để tách exosome huyết thanh/huyết tương, trước tiên hãy thêm 5 mL NaOH 0.1M để làm sạch cột tách, sau đó thêm tổng cộng 20 mL dung dịch đệm vào mẻ để làm sạch và cân bằng cột tách, sau đó thêm 5 mL etanol 20% để làm sạch cột tách. Sau khi vệ sinh, đậy nắp đáy màu trắng của cột tách; Cuối cùng, thêm 2mL etanol 20% để giữ ẩm, đậy kín nắp màu đỏ của cột tách và bảo quản cột tách ở nhiệt độ phòng.

1. Khi tách exosome khỏi huyết thanh/huyết tương khác nhau, đường cong rửa giải và độ tinh khiết của sản phẩm này có thể hơi khác nhau nhưng không ảnh hưởng đến xu hướng chung.

2. Khi cỡ mẫu lớn hoặc hàm lượng exosome trong mẫu thấp, mẫu có thể được cô đặc trước rồi tách riêng bằng cột sắc ký tách.

3. Trong quá trình tách exosome huyết thanh/huyết tương khỏi sản phẩm này, cần tránh sự gián đoạn kéo dài của dòng chất lỏng trong cột tách.

4. Trong quá trình sử dụng sản phẩm này, không tách các mẫu sinh học từ các nguồn khác nhau trên cùng một cột và không tái sử dụng cùng một cột quá 5 lần.

5. Sản phẩm này thích hợp để bảo quản và sử dụng ở nhiệt độ phòng, tránh sử dụng ở nhiệt độ thấp và sưởi ấm ở nhiệt độ cao.

6. Trong quá trình thí nghiệm, vui lòng mặc quần áo phòng thí nghiệm và đeo găng tay dùng một lần để tránh nhiễm bẩn và đảm bảo an toàn.

Chỉ dành cho mục đích nghiên cứu!

Chú phổ biến: cột sắc ký để tách exosome (siêu tế bào), cột sắc ký Trung Quốc để tách exosome (siêu tế bào) nhà sản xuất, nhà cung cấp, nhà máy