Protease TEV tái tổ hợp (Thẻ của anh ấy)

Protease TEV tái tổ hợp là tái tổ hợp được biểu hiện dưới dạng cysteine ​​protease His-tag Tobacco Etch Virus (TEV) ở Escherichia coli. TEV Protease là một cysteine ​​protease thường được sử dụng, có thể nhận biết trình tự 7 axit amin Glu-Asn-Leu-Tyr-Ph-Gln-Gly /Ser(ENLYFQG/S) và phân tách giữa Gln(Q) và Gly/Ser (G/S) dư lượng axit amin có tính đặc hiệu cao. Nhiệt độ tối ưu của TEV Protease tái tổ hợp để phân cắt là 3{{20}} độ và enzyme hoạt động trong khoảng nhiệt độ ( 29-34 độ ). Tuy nhiên, hoạt tính của enzyme sẽ giảm mạnh khi nhiệt độ đạt hoặc vượt quá 37 độ. Trong quá trình thực tế, để bảo toàn cấu trúc và hoạt động sinh học của protein mục tiêu càng nhiều càng tốt, nên sử dụng TEV Protease ở 4 độ. để tiêu hóa qua đêm. TEV Protease tái tổ hợp hoạt động trong khoảng pH từ 6,0 đến 9,0 nhưng sẽ bị bất hoạt khi pH bằng hoặc nhỏ hơn 5. Một ưu điểm nổi bật khác của TEV Protease là imidazole 400 mM vẫn có hoạt tính cao. Do đó, để tinh chế protein mục tiêu chứa thẻ His bằng cột niken, TEV Protease có thể được thêm trực tiếp vào dung dịch protein mục tiêu đã tinh chế chứa nồng độ imidazole cao và imidazole được loại bỏ bằng cách lọc máu ở 4 độ và được tiêu hóa đồng thời. Nó cũng có thể được tiêu hóa bằng TEV Protease sau khi lọc máu để loại bỏ các thẻ của Ngài. Cả TEV Protease được gắn thẻ His và thẻ His bị cắt bỏ trong dung dịch protein mục tiêu sau khi tiêu hóa bằng enzyme đều có thể được loại bỏ bằng cách liên kết với cột niken.

Ứng dụng: Nó thường được sử dụng để loại bỏ MBP, GST, His hoặc các protein thẻ khác khỏi protein tổng hợp. Bản thân TEV Protease tái tổ hợp có thẻ His liên kết với cột niken.

Nguồn: Thuốc lá Etch Virus (TEV) cysteine ​​protease, tái tổ hợp được biểu hiện ở Escherichia coli, có chứa thẻ His.

Hoạt tính của enzyme: Nó được định nghĩa là một đơn vị hoạt động để phân cắt hơn 85% chất nền 3 xấu (protein chứa vị trí phân cắt TEV Protease tái tổ hợp) trong vòng 1 giờ ở 30 độ, pH 8,0.

Bất hoạt hoặc ức chế: Các chất ức chế Protease serine thông thường như PMSF, AEBSF, bestatin, pepstatin và EDTA không ức chế hoạt động TEV Protease. Tuy nhiên, các chất ức chế Protease nhắm vào dư lượng cystein như NEM hoặc IAA có thể ức chế đáng kể hoạt động của TEV Protease. TEV Protease vẫn có hoạt tính cao ở nồng độ imidazole cao hơn.

Độ tinh khiết và nồng độ: Độ tinh khiết Lớn hơn hoặc bằng 95% theo SDS-PAGE, 10 U/μL.

Dung dịch lưu trữ protease TEV tái tổ hợp:50 mM Tris-HCl,250 mM NaCl,1 mM EDTA,5 mM DTT,50% (v/v) Glycerol,pH 8,0.

10×TEV Dung dịch đệm:500 mM Tris-HCl,500 mM NaCl,5 mM EDTA,10 mM DTT,pH 8,0.

Tàu có đá ướt; Bảo quản ở -20 độ ; Có hiệu lực trong 12 tháng.

1. Hệ thống tiêu hóa Protease được khuyến nghị:

2. Hệ thống phản ứng được đặt ở 30 độ trong 1-4 giờ. Nếu protein mục tiêu không ổn định ở 30 độ, hệ thống phản ứng có thể được đặt ở 4 độ qua đêm để tiêu hóa enzyme (khoảng 16 giờ);

3. 10 µL sản phẩm tiêu hóa bằng enzyme được lấy để điện di SDS-PAGE để đánh giá lượng tiêu hóa enzyme và điều kiện phản ứng.

1. Các sản phẩm enzyme phải được đặt trong hộp đá hoặc bồn nước đá khi sử dụng và bảo quản riêng ở nhiệt độ -20 ngay sau khi sử dụng;

2. Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng đeo kính an toàn, găng tay hoặc quần áo bảo hộ.

Ví dụ về ứng dụng tiêu hóa enzyme

Hình 1: Ảnh hưởng của quá trình tiêu hóa Protease TEV tái tổ hợp của protein cơ chất đối chứng (protein tổng hợp A+B chứa vị trí cắt Enzyme TEV Protease tái tổ hợp) (Điều kiện tiêu hóa enzyme là 30 độ và pH 8.0, tương ứng trong 0 phút, 10 phút, 20 phút, 30 phút, 1 giờ và 2 giờ, lần lượt tương ứng với Lane 1-6 và tỷ lệ khối lượng của cơ chất với enzyme được thêm vào trong hệ thống tiêu hóa enzyme là 20:1).

Chỉ dành cho mục đích nghiên cứu!

Chú phổ biến: nhà sản xuất, nhà cung cấp, nhà máy sản xuất protease tev tái tổ hợp (his-tag) của Trung Quốc