Bộ phát hiện chu kỳ tế bào và apoptosis

 

Tên sản phẩm	Mèo.Không	Thông số kỹ thuật.
Bộ phát hiện chu kỳ tế bào và apoptosis	G1700-50T	50 T

 

 

Chu kỳ tế bào đề cập đến toàn bộ quá trình của tế bào từ khi hoàn thành một quá trình phân chia cho đến khi kết thúc quá trình phân chia tiếp theo, chủ yếu được chia thành hai giai đoạn: giai đoạn gián đoạn và giai đoạn phân bào (pha M). Pha nội bào chủ yếu bao gồm pha đầu của quá trình tổng hợp DNA (pha G1), pha muộn của quá trình tổng hợp DNA (pha S) và pha muộn của quá trình tổng hợp DNA (pha G2). Trình tự của toàn bộ chu kỳ tế bào có thể được biểu thị dưới dạng G1→S→G2→M. Trước hết, ở pha G1, tế bào chủ yếu tổng hợp RNA và protein để chuẩn bị nguyên liệu và năng lượng cho tế bào bước vào pha S. Sau đó, nó bước vào pha S: các tế bào bắt đầu tổng hợp DNA, một số histone và các chất khác, và hàm lượng DNA của tế bào bắt đầu tăng lên. Cuối cùng là pha G2: lúc này hàm lượng DNA của tế bào đã gấp đôi so với pha G1 và đã ngừng sao chép DNA, chuyển sang pha phân bào để thực hiện nhiều quá trình tổng hợp protein và vật chất khác; Nếu tế bào ở pha G0(Tế bào tạm thời ngừng phân chia, biệt hóa và không hoạt động)/G1 thì hàm lượng DNA của tế bào là 1N; Vậy tế bào ở G2 có DNA 2N; Hàm lượng DNA của các tế bào pha S giữa G1 và G2 là từ 1N đến 2N. Trong các tế bào apoptotic, nhân sẽ tập trung và xảy ra sự phân mảnh DNA, dẫn đến mất một phần đoạn DNA bộ gen, do đó hàm lượng DNA nhỏ hơn 1N và được gọi là đỉnh sub-G1, tức là đỉnh tế bào apoptotic , xuất hiện trên bản đồ huỳnh quang được phát hiện bằng phương pháp tế bào học dòng chảy. Do đó, chu kỳ và trạng thái tế bào có thể được đánh giá dựa trên hàm lượng DNA của tế bào.

 

Apoptosis cũng có thể được phát hiện bằng cách quan sát những thay đổi trong tán xạ ánh sáng tế bào bằng phương pháp tế bào học dòng chảy. Khi quá trình apoptosis xảy ra, tế bào chất và chất nhiễm sắc tập trung và nhân bị phân mảnh, dẫn đến cơ thể bị chết theo chương trình. Chất nhiễm sắc co lại và mật độ tế bào tăng lên trong giai đoạn tiền apoptosis. Trong giai đoạn cuối của quá trình apoptosis, các tế bào tạo ra cơ thể apoptotic và sự tán xạ ánh sáng của tế bào thay đổi.

 

Bộ công cụ phân tích chu kỳ tế bào và quá trình tự chết tế bào sử dụng phương pháp nhuộm Propidium cổ điển để phát hiện và phân tích Chu kỳ tế bào và quá trình chết tế bào. Propidium iodide có thể gắn vào sợi DNA đôi và khiến nó phát huỳnh quang. Chu kỳ và trạng thái của tế bào có thể được phân biệt bằng đặc điểm là cường độ huỳnh quang tỷ lệ thuận với hàm lượng DNA sợi đôi và sự thay đổi thường xuyên của hàm lượng DNA trong các chu kỳ tế bào khác nhau. Bộ này có thể được sử dụng để phát hiện chu kỳ tế bào và phát hiện apoptosis của tế bào mô, tế bào bám dính hoặc tế bào lơ lửng (nếu được sử dụng để phát hiện chu kỳ tế bào và apoptosis của mô, mô phải được tiêu hóa thành trạng thái tế bào đơn lẻ trước khi phát hiện).

 

 

Vận chuyển bằng đá ướt; Được bảo quản ở -20 độ tránh ánh sáng, dung dịch đệm nhuộm có thể được bảo quản ở nhiệt độ 4 độ; Nó có giá trị trong 12 tháng.

 

 

Thành phầnCon số	Thành phần	G1700-50T
G1700-1	Dung dịch nhuộm PI (50×)	500 μL
G1700-2	RNase A (50% c3% 97)	500 μL
G1700-3	Bộ đệm nhuộm	25mL
Hướng dẫn sử dụng		1 cái

 

 

1. Môi trường nuôi cấy tế bào chứa huyết thanh;

2. Dung dịch tiêu hóa trypsin (khuyến nghị sử dụng G4001);

3. Bộ đệm PBS (khuyên dùng G4202);

4. 75% etanol.

 

 

1. Chuẩn bị mẫu tế bào (số lượng tế bào được kiểm soát tại1×105~1 ×106)

1.1. Đối với tế bào bám dính:loại bỏ môi trường nuôi cấy, thêm dung dịch tiêu hóa trypsin để tiêu hóa tế bào và quan sát tế bào trở nên tròn và lỏng lẻo dưới kính hiển vi. Quá trình tiêu hóa được kết thúc bằng cách thêm một lượng thích hợp môi trường tế bào có chứa huyết thanh và các tế bào được thổi bay nhẹ nhàng để tạo huyền phù. Huyền phù được chuyển sang ống ly tâm, ly tâm ở tốc độ 1000 g trong 3-5 phút và chất nổi phía trên được loại bỏ để giữ lại kết tủa tế bào. Sau đó, kết tủa tế bào được rửa 1-2 lần bằng dung dịch đệm PBS đã làm lạnh trước và phần nổi phía trên được loại bỏ bằng cách ly tâm theo cách tương tự để giữ lại kết tủa tế bào.

1.2. Đối với các tế bào lơ lửng:chuyển tế bào vào ống ly tâm, ly tâm ở tốc độ 1000 g trong 3-5 phút, loại bỏ phần nổi phía trên và giữ lại kết tủa tế bào; Sau đó, kết tủa tế bào được rửa 1-2 lần bằng dung dịch đệm PBS đã làm lạnh trước và phần nổi phía trên được loại bỏ bằng cách ly tâm theo cách tương tự để giữ lại kết tủa tế bào.

1.3. Đối với tế bào mô:Cắt khăn giấy thành những miếng nhỏ nhất có thể. Theo nguồn mô, khối mô được tiêu hóa bởi trypsin, collagenase và các enzym tiêu hóa khác, và huyền phù tế bào đơn thu được bằng cách lọc qua màn hình lưới 100-300. Huyền phù tế bào đã lọc được chuyển sang ống ly tâm, ly tâm ở tốc độ 1000 g trong 3-5 phút và phần nổi phía trên được loại bỏ để giữ lại kết tủa tế bào. Sau đó, kết tủa tế bào được rửa 1-2 lần bằng dung dịch đệm PBS đã làm lạnh trước và phần nổi phía trên được loại bỏ bằng cách ly tâm theo cách tương tự để giữ lại kết tủa tế bào.

 

2. Cố định mẫu tế bào

2.1. Thêm 1 mL etanol 75% đã làm lạnh trước trên đá vào mẫu kết tủa tế bào đã thu thập và thổi nhẹ tế bào để chúng được trộn kỹ;

2.2. Các tế bào được cố định ở 4 độ trong 30 phút hoặc lâu hơn (thường là 2 giờ trở lên có thể đảm bảo hiệu ứng nhuộm màu và 12-24 h có thể tốt hơn để cải thiện hiệu ứng nhuộm màu).

2.3. Sau khi cố định trong một thời gian nhất định, tế bào được ly tâm ở tốc độ 1000 g trong 3-5 phút để loại bỏ dung dịch cố định etanol và giữ lại kết tủa tế bào;

2.4. Chạm vào đáy ống ly tâm để phân tán tế bào, hòa lại và rửa tế bào bằng dung dịch đệm PBS, ly tâm ở 1000 g trong 3-5 phút và loại bỏ phần nổi phía trên để thu kết tủa tế bào;

 

3. Chuẩn bị và nhuộm màuof Giải pháp làm việc

3.1. Theo bảng sau, dung dịch nhuộm có thể được điều chế ngoài ánh sáng và lượng có thể tăng hoặc giảm theo tỷ lệ bằng nhau tùy theo yêu cầu sử dụng (dung dịch nhuộm đã chuẩn bị có thể được bảo quản ở nhiệt độ 4 độ trong thời gian ngắn, vui lòng sử dụng nó trong cùng một ngày);

 

	1 mẫu	5Vật mẫus	10 mẫu
Bộ đệm nhuộm	480 μL	2,4mL	4,8mL
Vết bẩn PI (50×)	10 μL	50 μL	100 μL
RNaseA (50×)	10 μL	50 μL	100 μL
Tổng khối lượng	500 μL	2,5mL	5mL

 

3.2. Chạm vào đáy ống ly tâm để phân tán các tế bào kết tủa ở Bước 2.4, sau đó thêm 500 μL dung dịch làm việc nhuộm đã chuẩn bị và thổi nhẹ để phân tán các tế bào và trộn với dung dịch làm việc nhuộm;

3.3. Sau khi ủ ở 37 độ trong 30 phút trong bóng tối, có thể sử dụng phương pháp tế bào học dòng chảy để phát hiện.

 

4. Phát hiện dòng chảyaphân tích thứ 2

Huỳnh quang màu đỏ được phát hiện bằng phương pháp tế bào học dòng chảy ở bước sóng kích thích 488nm và sự tán xạ ánh sáng cũng được phát hiện. Phân tích hàm lượng DNA tế bào và phân tích tán xạ ánh sáng được thực hiện bằng phần mềm phân tích thích hợp.

 

 

1. Tất cả các loại thuốc nhuộm huỳnh quang đều có vấn đề dập tắt huỳnh quang, vì vậy hãy cố gắng tránh ánh sáng trong quá trình sử dụng và bảo quản.

2. Trước khi thí nghiệm, nên đồng bộ hóa chu kỳ tế bào để tránh sự khác biệt lớn về khả năng sinh sản do các chu kỳ tế bào khác nhau gây ra.

3. Mật độ trồng ô thí nghiệm không được quá cao hoặc quá thấp để tránh ức chế tiếp xúc hoặc phụ thuộc vào mật độ.

4. Chú ý bảo vệ khi vận hành dung dịch nhuộm PI, tránh tiếp xúc trực tiếp với cơ thể người hoặc hít phải.

5. Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng mặc áo khoác phòng thí nghiệm và đeo găng tay dùng một lần khi vận hành.

 

Chỉ dành cho mục đích nghiên cứu!

 

 

Chú phổ biến: bộ phát hiện chu trình tế bào và apoptosis, nhà sản xuất, nhà cung cấp, nhà máy sản xuất bộ phát hiện chu kỳ tế bào và apoptosis ở Trung Quốc