Bộ đếm tế bào-8

 

Tên sản phẩm	Mèo.Không	Thông số kỹ thuật.
Bộ đếm tế bào-8	G4103-1ML	1mL
	G4103-5ML	5mL

 

 

Bộ đếm tế bào-8, còn gọi là bộ CCK-8 (hoặc CCK8), là bộ phát hiện nhanh và có độ nhạy cao được sử dụng rộng rãi trong quá trình tăng sinh tế bào và gây độc tế bào. Nguyên tắc phát hiện là khi có mặt thuốc thử ghép điện tử, hợp chất WST-8 trong thuốc thử phát hiện bị dehydrogenase nội bào khử thành hợp chất formazan màu vàng cam hòa tan trong nước, có độ hấp thụ tối đa ở 450 nm. đỉnh cao. Lượng formazan tỷ lệ thuận với số lượng tế bào sống sót, tức là tế bào tăng sinh càng nhanh thì màu càng đậm; độc tính tế bào càng lớn thì màu càng nhạt. Đối với cùng một ô, có mối quan hệ tuyến tính giữa sắc độ màu và số lượng ô. WST-8 trong bộ này không có độc tính rõ ràng đối với tế bào và có thể được sử dụng để phát hiện sự tăng sinh tế bào do các cytokine ngoại sinh gây ra, cũng như phát hiện độc tính tế bào do thuốc và các thuốc thử gây độc tế bào khác gây ra hoặc phát hiện ức chế tăng trưởng tế bào do một số loại thuốc gây ra. Đây là phiên bản nâng cấp của phương pháp phát hiện MTT.

Bộ sản phẩm này sử dụng thuận tiện, không cần chuẩn bị hay pha loãng, không cần thu thập hoặc rửa tế bào và không cần hòa tan lại hợp chất formazan. Nó phù hợp cho cả tế bào bám dính và tế bào huyền phù. Và phenol đỏ và huyết thanh không có ảnh hưởng đáng kể đến việc xác định bộ sản phẩm này.

 

 

Vận chuyển bằng đá ướt, tránh ánh sáng; Nó có giá trị trong 12 tháng khi được bảo quản trong bóng tối ở nhiệt độ 4 độ; nó có giá trị trong 24 tháng khi được bảo quản ở mức -20 nếu không sử dụng trong thời gian dài.

 

 

Thành phần	G4103-1ML	G4103-5ML
Bộ đếm tế bào-8	1mL	5mL
Hướng dẫn sử dụng		1 cái

 

 

1. Tạo đường cong chuẩn (Thực hiện thao tác này khi xác địnhtanh ấy Số cụ thểof Tế bào)

A) Đếm số lượng tế bào trong dịch huyền phù tế bào đã chuẩn bị bằng máy đếm tế bào trước khi cấy tế bào.

B) Pha loãng môi trường theo tỷ lệ bằng nhau để tạo thành gradient nồng độ tế bào. Nói chung, cần có 3-5 gradient nồng độ tế bào, với 3-6 giếng trùng lặp trong mỗi nhóm.

C) Sau khi cấy, nuôi cấy cho đến khi tế bào bám vào thành, sau đó thêm thuốc thử CCK-8 trong một khoảng thời gian nhất định để đo giá trị OD và tạo đường cong chuẩn với số lượng tế bào là abscissa ( Trục X) và giá trị OD làm tọa độ (trục Y). . Theo đường cong tiêu chuẩn này, có thể xác định được số lượng tế bào trong mẫu chưa biết (tiền đề của việc sử dụng đường cong tiêu chuẩn này là các điều kiện thí nghiệm phải nhất quán và thuận tiện để xác định số lượng tế bào được cấy và thời gian ủ sau đó thêm CCK-8).

2. Xét nghiệm khả năng sống của tế bào

A) Huyền phù tế bào hạt (100 µL/giếng) trong đĩa giếng 96-. Ủ trước đĩa trong tủ ấm (ở 37 độ, 5% CO2).

B) Thêm 10 µL dung dịch CCK{1}} vào mỗi giếng (cẩn thận không tạo bọt khí trong giếng, điều này sẽ ảnh hưởng đến kết quả đọc OD).

C) Ủ đĩa nuôi cấy trong tủ ấm trong 2 giờ.

D) Đo độ hấp thụ ở bước sóng 450 nm bằng máy đọc đĩa vi thể.

E) Nếu giá trị OD không được đo tạm thời, nếu bạn định đo nó sau, bạn có thể thêm 10 µL dung dịch HCl 0,1M hoặc 1% SDS (W/V) vào mỗi giếng và Đậy đĩa nuôi cấy và bảo quản ở nhiệt độ phòng trong bóng tối. Độ hấp thụ không thay đổi trong vòng 24 giờ.

3. Xét nghiệm tăng sinh-độc tính tế bào

A) Chuẩn bị 100 µL huyền phù tế bào trong đĩa giếng 96-. Ủ trước các đĩa trong tủ ấm 24 giờ (ở 37 độ, 5% CO2).

B) Thêm 10 µL nồng độ khác nhau của chất thử vào đĩa nuôi cấy. Ủ trong máy ấp trong khoảng thời gian thích hợp (ví dụ: 6, 12, 24 hoặc 48 giờ).

C) Thêm 10 µL dung dịch CCK{1}} vào mỗi giếng (cẩn thận không tạo bọt khí trong giếng, điều này sẽ ảnh hưởng đến kết quả đọc OD). Nếu chất cần thử là chất oxy hóa hoặc chất khử thì có thể loại bỏ tác dụng của thuốc bằng cách thay môi trường bằng môi trường mới (loại bỏ môi trường, rửa tế bào hai lần bằng môi trường, sau đó thêm môi trường mới) trước khi thêm CCK{{2} }.

D) Ủ đĩa trong tủ ấm trong 2 giờ.

E) Đo độ hấp thụ ở bước sóng 450 nm bằng máy đọc đĩa vi thể.

F) Nếu giá trị OD không được đo tạm thời, nếu bạn định đo nó sau, bạn có thể thêm 10 µL dung dịch HCl 0,1M hoặc 1% SDS (W/V) vào mỗi giếng và Đậy đĩa nuôi cấy và bảo quản ở nhiệt độ phòng trong bóng tối. Độ hấp thụ không thay đổi trong vòng 24 giờ.

4. Tính toán sức sống

Khả năng sống của tế bào (%) {{0}} [A (liều lượng) - A (để trống)] / [ A (0 liều lượng) - A (để trống)] × 100

A (định lượng): Độ hấp thụ của giếng với tế bào, dung dịch CCK{0}} và dung dịch thuốc

A (để trống): độ hấp thụ của giếng có môi trường và dung dịch CCK-8 không có tế bào

A (0 liều lượng): Độ hấp thụ của giếng có tế bào, dung dịch CCK-8 và không có dung dịch thuốc

Khả năng sống của tế bào: khả năng tăng sinh tế bào hoặc khả năng gây độc tế bào

 

 

1. Nguyên lý phát hiện của bộ sản phẩm này phụ thuộc vào phản ứng được xúc tác bởi dehydrogenase. Nếu có nhiều chất khử (chẳng hạn như một số chất chống oxy hóa) trong mẫu sẽ cản trở việc phát hiện, hãy cố gắng loại bỏ chúng.

2. Nên tạo nhiều giếng để khảo sát số lượng tế bào được cấy và thời gian ủ sau khi thêm thuốc thử CCK{1}}.

3. Bạch cầu có thể cần được nuôi cấy trong thời gian dài hơn.

4. Khi sử dụng các đĩa giếng 96-tiêu chuẩn, lượng gieo mầm tối thiểu của các tế bào bám dính ít nhất là 1,000 tế bào/giếng (100 µL môi trường). Độ nhạy phát hiện bạch cầu tương đối thấp nên thể tích cấy được khuyến nghị ít nhất là 2.500 tế bào/giếng (100 µL môi trường). Nếu bạn muốn sử dụng đĩa 24-giếng hoặc 6-giếng, trước tiên hãy tính kích thước vật liệu cấy tương ứng trên mỗi giếng và thêm dung dịch CCK-8 ở mức 10% tổng thể tích môi trường trong mỗi giếng .

5. Nếu không có bộ lọc 450 nm, có thể sử dụng bộ lọc có độ hấp thụ trong khoảng 430-490 nm, nhưng 450 nm có độ nhạy phát hiện cao nhất.

6. Độ hấp thụ của phenol đỏ trong môi trường có thể được loại bỏ bằng cách trừ đi độ hấp thụ của nền trong giếng trống trong quá trình tính toán, do đó sẽ không ảnh hưởng đến việc phát hiện.

7. Tránh tạo ra bọt khí khi thêm thuốc thử phát hiện, nếu không sẽ ảnh hưởng đến kết quả phát hiện.

8. Vì sự an toàn và sức khỏe của bạn, vui lòng mặc áo khoác phòng thí nghiệm và đeo găng tay dùng một lần.

 

Chỉ dành cho mục đích nghiên cứu!

 

 

Chú phổ biến: bộ đếm tế bào-8, bộ đếm tế bào Trung Quốc-8 nhà sản xuất, nhà cung cấp, nhà máy